جينياتي مطالعي کي هلائڻ جي عمل ۾، اسان کي اڪثر آر اين اي جي ناکافي نمونن سان منهن ڏيڻو پوي ٿو، مثال طور، ننڍڙن جسماني زباني ٽومر جي مطالعي لاء، ايستائين جو واحد سيل نمونن، ۽ مخصوص جين ميوٽيشنز جا نمونا جيڪي انساني خاني ۾ تمام گهٽ سطح تي نقل ڪيا ويا آهن.يقينن، COVID-19 ٽيسٽ لاءِ جيڪڏهن swabs صحيح جاءِ تي نه آهن يا سيمپلنگ دوران ڪافي وقت نه آهن ته نموني جي سائيز تمام گهٽ هوندي، اهو ئي سبب آهي ته صحت ۽ خانداني منصوبابندي جو ڪميشن ٻه ڏينهن اڳ سامهون آيو هو. امتحان پاس ڪيو، ۽ جيڪڏهن نيوڪليڪ ايسڊ نموني ڇهه نمونا نه ورتو، توهان ان کي رپورٽ ڪري سگهو ٿا.
ريجنٽ جي حساسيت اهم آهي ڇو ته اسان کي اهو مسئلو آهي يا اهو مسئلو آهي، تنهنڪري اسان RT-PCR جي حساسيت کي بهتر ڪرڻ لاء ڇا ڪري سگهون ٿا؟
ان کان اڳ جو اسان ممڪن حلن تي بحث ڪريون، اچو ته ان صورتحال سان ٻن وڏين پيچيدگين جو ذڪر ڪريون جن جو اسان ذڪر ڪيو آهي.
سڀ کان پهريان، اسان آر اين اي جي نقصان بابت پريشان آهيون جڏهن اسان وٽ اسان جي نموني ۾ صرف چند سيل جي آبادي آهي.جيڪڏهن روايتي علحدگيءَ ۽ صفائي جا طريقا استعمال ڪيا وڃن، جهڙوڪ ڪالمن جو طريقو يا نيوڪليڪ ايسڊ ورن جو طريقو، اتي تمام گهڻو امڪان آهي ته ڪجهه نمونا گم ٿي ويندا.ھڪڙو حل ھڪڙو ڪيريئر ماليڪيول شامل ڪرڻ آھي، جھڙوڪ tRNA، پر ان جي باوجود، ڪا به ضمانت نه آھي ته اسان جي بحالي جو تجربو ٺيڪ آھي.
پوء ڇا هڪ بهتر طريقو آهي؟ڪلچر ٿيل سيلز يا مائڪرواناتومي نموني لاء سٺو اختيار سڌو ليسس استعمال ڪرڻ آهي.
خيال اهو آهي ته سيلز کي 5 منٽن لاءِ ورهايو وڃي، آر اين اي کي محلول ۾ ڇڏايو، پوءِ 2 منٽن لاءِ رد عمل کي روڪيو، پوءِ lysate کي سڌو سنئون ريورس ٽرانسڪرپشن جي رد عمل ۾ شامل ڪيو وڃي ته جيئن ڪو به RNA ضايع نه ٿئي، ۽ آخر ۾ نتيجو ڪندڙ cDNA سڌو سنئون. حقيقي وقت جي رد عمل ۾.
پر ڇا جيڪڏهن، هڪ محدود شروعاتي نقطي يا ٽارگيٽ جين اظهار جي هڪ ننڍڙي مقدار جي ڪري، اسان سڀني آر اين اي کي ٻيهر استعمال ڪري سگهون ٿا ۽ اڃا تائين ڪافي ٽيمپليٽ مهيا نه ڪري سگهون ٿا ته هڪ سٺو حقيقي وقت سگنل حاصل ڪرڻ لاء؟
انهي حالت ۾، اڳڀرائي وارو قدم تمام ڪارائتو ٿي سگهي ٿو.
ريورس ٽرانسپشن کان پوء حساسيت وڌائڻ لاء هيٺ ڏنل اسڪيم آهي.شروع ڪرڻ کان پهريان، اسان کي پڇڻ جي ضرورت آهي ته ڪهڙن هدفن ۾ اسان جي دلچسپي آهي، ته جيئن انهن مقصدن لاءِ مخصوص پرائمر ڊزائين ڪرڻ لاءِ اڳڀرائي لاءِ.
اهو حاصل ڪري سگهجي ٿو هڪ مخلوط پرائمر ٺاهڻ سان 100 جوڙن جي پرائمر ۽ 10 کان 14 ڀيرا جي رد عمل واري چڪر سان.تنهن ڪري، حاصل ڪيل سي ڊي اين اي کي اڳڀرائي ڪرڻ لاءِ خاص طور تي هن ضرورت لاءِ ٺهيل هڪ ماسٽر ميڪس جي ضرورت آهي.
10 ۽ 14 جي وچ ۾ چڪر جي تعداد کي ترتيب ڏيڻ جو سبب اهو آهي ته سائيڪلن جو هي محدود تعداد مختلف مقصدن جي وچ ۾ بي ترتيبي کي يقيني بڻائي ٿو، جيڪو تحقيق ڪندڙن لاء اهم آهي جن کي مقدار جي ماليڪيولر معلومات جي ضرورت آهي.
اڳڀرائي کان پوءِ، اسان وڏي مقدار ۾ سي ڊي اين اي حاصل ڪري سگهون ٿا، ته جيئن پٺيءَ جي پڇاڙيءَ ۾ پتو لڳائڻ واري حساسيت تمام گهڻي بهتر ٿي وڃي، ۽ اسان نموني کي به گھٽائي سگھون ٿا ۽ ممڪن بي ترتيبي غلطين کي ختم ڪرڻ لاءِ ڪيترائي حقيقي وقت PCR رد عمل انجام ڏئي سگهون ٿا.
پوسٽ جو وقت: اپريل-11-2023